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[发明专利]5’→3’核酸外切酶在基因编辑系统中的用途和基因编辑系统及其编辑方法-CN202310233884.4在审
发明人：李寅青;王沛喆;富晶晶 -专利权人：清华大学
申请日： 2023-03-03 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明涉及一种5’→3’核酸外切酶在基因编辑系统中的用途和基因编辑系统及其编辑方法。所述5’→3’核酸外切酶与所述基因编辑系统中的位点特异性核酸酶为非融合状态；所述基因编辑系统包含：位点特异性核酸酶、5’→3’核酸外切酶和供体DNA，其中，所述5’→3’核酸外切酶与所述位点特异性核酸酶为非融合状态本发明通过将5’→3’核酸外切酶引入基因编辑系统中，能够提高精准基因编辑效率。
核酸外切酶基因编辑系统中的用途及其方法

[发明专利]突变的核酸外切酶及其编码基因与应用-CN201810977873.6有效
发明人：李卓;单大鹏;卢淑红;张雪松;陈凯英;解兵斌;陈孜孟;申玉龙;周礼芹 -专利权人：国家海洋局第三海洋研究所
申请日： 2018-08-27 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种突变的核酸外切酶及其编码基因与应用。本发明的突变的核酸外切酶的氨基酸序列为序列表中序列1所示。编码突变的核酸外切酶的基因的核苷酸序列为序列表中序列2所示。本发明的突变的核酸外切酶能够提高PCR扩增的效率。
突变核酸外切酶及其编码基因应用

[发明专利]一种核酸外切酶突变体及包含该突变体的核酸等温扩增反应体系-CN202211050794.3在审
发明人：杨挥 -专利权人：苏州青帆科技有限公司
申请日： 2022-08-30 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种核酸外切酶突变体及包含该突变体的核酸等温扩增反应体系，所述核酸外切酶突变体基于天然核酸外切酶进行突变产生，突变包括：(a)第58位甘氨酸G突变为半胱氨酸C；(b)第129位酪氨酸Y突变为谷氨酸本发明还提供了一种核酸外切酶突变体的核酸等温扩增反应体系，所述核酸等温扩增反应体系包含所述核酸外切酶突变体，本发明提供的核酸外切酶突变体，活性高，较现有技术而言明显加快了核酸体系等温扩增的效率，缩短了反应时间
一种核酸外切酶突变体包含核酸等温扩增反应体系

[发明专利]用于编辑真核细胞的内源DNA的融合蛋白-CN202180076089.8在审
发明人： S·马里隆内特;A·蒂西尔;T·施赖伯 -专利权人：莱布尼茨植物生化研究所
申请日： 2021-11-10 - 公布日： 2023-08-18 - 主分类号： A61K38/46 文献下载
摘要：一种用于在靶位点处编辑真核细胞或真核生物体中的内源DNA的蛋白，其包含位点特异性核酸内切酶和5’‑3’核酸外切酶，其中所述5’‑3’核酸外切酶是单体的5’‑3’核酸外切酶。
用于编辑真核细胞内源 dna 融合蛋白

[发明专利]高通量测序文库及其构建方法-CN201510055922.7有效
发明人：蒋智;王大伟;李明洲;李宗文;朱海浩;王苗英;刘运超 -专利权人：北京诺禾致源科技股份有限公司
申请日： 2015-02-03 - 公布日： 2017-06-06 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：该构建方法包括以下步骤S1，从DNA‑蛋白交联复合体中获取DNA片段；S2，利用核酸外切酶对DNA片段进行酶切；以及S3，对酶切后的DNA片段进行文库构建，得到高通量测序文库；其中，核酸外切酶是指作用于双链DNA，具有3’→5’核酸外切酶活性而不具有DNA聚合酶活性的核酸酶。上述文库构建方法，通过用具有3’→5’核酸外切酶活性而不具有DNA聚合酶活性的核酸外切酶替代现有技术中的具有3’→5’核酸外切酶活性且具有DNA聚合酶活性的klenow片段，因而能够将非目的片段中的标记去除得更彻底
通量序文及其构建方法

[发明专利]一种定量核酸外切酶I活性测定方法-CN201410502152.1在审
发明人：曹林;徐晓昱;王静 -专利权人：南京诺唯赞生物科技有限公司
申请日： 2014-09-28 - 公布日： 2015-01-21 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种定量核酸外切酶I活性测定方法，所述方法包括以下步骤：首先提供与单链DNA模板互补的引物，随后加入核酸外切酶I进行外切反应；外切反应后，加入单链DNA模板并退火，形成单链DNA模板/引物复合物；其后加入聚合酶，合成双链DNA；接着测定反应体系中单链或双链DNA的相对量，并由测定结果推导出核酸外切酶I活性程度，其中核酸外切酶I活性程度与反应体系中双链DNA的量成反比。与现有技术相比，本发明的方法无放射性污染，操作简单便捷，可以对核酸外切酶Ⅰ活性进行定量的检测分析。
一种定量核酸外切酶活性测定方法

[发明专利]不耐热性核酸外切酶-CN201580043582.4有效
发明人：特里萨·索尔斯塔;伊丽莎白·利尔·安德烈亚森;马里特·圣·洛伦岑;奥拉夫·拉纳;莫滕·埃尔德;阿特勒·诺阿尔夫·拉森;伊冯·彼得罗夫斯基;尼尔斯·彼得·威尔兰森 -专利权人：阿克蒂克塞姆股份有限公司;特罗姆瑟大学-挪威北极圈大学
申请日： 2015-08-19 - 公布日： 2019-04-02 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了核酸外切酶或其酶促活性片段，所述核酸外切酶具有SEQ ID No.1的氨基酸序列或与其至少约50％相同的氨基酸序列，其中所述核酸外切酶或其酶促活性片段(i)通过在由10mM Tris‑HClpH 8.5，50mM KCl和5mM MgCl₂组成的缓冲液中在约55℃的温度下加热10分钟而基本上不可逆地失活；(ii)对于单链DNA基本上特异性；和(iii)具有3’‑5’核酸外切酶活性本发明还提供了其中使用核酸外切酶或其酶促活性片段的从样品中去除单链DNA的方法，核酸扩增方法，逆转录方法和核酸序列分析方法。本发明还进一步提供了编码所述核酸外切酶或其酶促活性片段的核酸以及包含其的试剂盒或组合物。
耐热性核酸外切酶

[发明专利]实时PCR检测中抗高温聚合酶核酸外切酶活性的荧光探针-CN200610036633.3有效
发明人：黄秋英;李庆阁 -专利权人：厦门大学
申请日： 2006-07-24 - 公布日： 2007-01-24 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：实时PCR检测中抗高温聚合酶核酸外切酶活性的荧光探针，涉及一类荧光探针。提供在实时PCR检测中能够抵抗高温聚合酶核酸外切酶活性的一类荧光探针。给出经修饰使其在实时PCR检测中能抗高温聚合酶的5′→3′核酸外切酶活性且不产生非特异信号的荧光探针、经修饰使其在长片段实时PCR扩增检测中能抗高温聚合酶的3′→5′核酸外切酶活性且不产生非特异信号的荧光探针和经修饰使其在长片段实时PCR扩增检测中能同时抗5′→3′核酸外切活性和3′→5′核酸外切酶活性且不产生非特异信号的荧光探针。
实时 pcr 检测高温聚合核酸外切酶活性荧光探针

[发明专利]一种T5核酸外切酶在大肠杆菌中的制备方法-CN201410382116.6在审
发明人：孙启明;徐卫国;张亚;陈远 -专利权人：孙启明
申请日： 2014-08-05 - 公布日： 2014-11-19 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明是一种T5核酸外切酶(T5 Exonuclease)在大肠杆菌中的制备方法，属生物化学领域。本发明通过载体构建将T5核酸外切酶基因和肠激酶酶切位点克隆到含GST标签的pGEX载体中，在低温和低浓度IPTG条件下诱导T5核酸外切酶融合蛋白表达，蛋白的表达量达到15％。通过GST亲和层析、EK酶切以及离子交换层析纯化，得到了不带任何标签的T5核酸外切酶，比活力约为8000units/mg。
一种 t5 核酸外切酶大肠杆菌中的制备方法

[发明专利]一种密码子优化的核酸外切酶Ⅲ基因及其表达方法-CN202210545286.6在审
发明人：龚晓洁;赵军;侯启如;王娟;李志民 -专利权人：安诺优达基因科技（北京）有限公司;北京安诺优达医学检验实验室有限公司
申请日： 2022-05-19 - 公布日： 2022-08-02 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本申请公开了一种编码核酸外切酶Ⅲ的核酸分子，所述核酸分子包括如SEQ ID NO：02所示的核苷酸序列，本申请还公开了一种包含上述核苷酸序列的重组载体和宿主细胞，及其表达方法和所生产的核酸外切酶Ⅲ的用途，本申请所提供的编码核酸外切酶Ⅲ的基因型和构建的表达载体可作为Exo III规模化生产的靶标而加以应用，具备商业价值。
一种密码子优化核酸外切酶基因及其表达方法

[发明专利]简单、灵敏检测核酸外切酶III活性的探针及其应用-CN201610111735.0有效
发明人：李保新;连晋予 -专利权人：陕西师范大学
申请日： 2016-02-29 - 公布日： 2018-08-24 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种简单、灵敏检测核酸外切酶III活性的探针及其应用，该探针是从5'端到3'端由3～6个重复的CG碱基序列构成的DNA，且3'端标记荧光基团。当检测体系中含有核酸外切酶III时，它能沿3'→5'方向逐步催化水解双链DNA生成单核苷酸，使荧光基团与DNA分离而游离在溶液中，荧光基团的荧光得以恢复，通过检测体系的荧光强度即可实现核酸外切酶III活性的定量检测采用本发明探针检测核酸外切酶III活性的方法简单、快捷、灵敏，且具有很好的特异性，检出限可达到5×10‑4U/mL。本发明探针还可用于核酸外切酶III抑制剂的筛选。
简单灵敏检测核酸外切酶 iii 活性探针及其应用

[发明专利]基于磁分离与高保真聚合酶校正功能的核酸序列分析方法-CN201110097983.1有效
发明人：何农跃;曾新 -专利权人：东南大学
申请日： 2011-04-19 - 公布日： 2011-09-21 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：一种基于磁分离与高保真聚合酶校正功能的核酸序列分析方法，1)将耐核酸外切酶消化的测序引物固定于磁性介质上，与待测DNA序列进行杂交；2)加入成分包括不具有核酸外切酶活性之DNA聚合酶的延伸反应溶液，延伸经过标记的脱氧核糖核苷酸单体与双脱氧核糖核苷酸单体，通过检测标记物信号得到核苷酸种类与个数信息；3)加入成分包括具有核酸外切酶活性之高保真DNA聚合酶的延伸反应溶液，利用高保真聚合酶的校正功能移除2)中已延伸的ddNTP并替换延伸上耐核酸外切酶消化的核苷酸单体
基于分离高保真聚合校正功能核酸序列分析方法

[发明专利]利用高保真DNA聚合酶介导的替换性引物延伸反应进行序列分析的方法-CN200810052351.1无效
发明人：李凯;张佳 -专利权人：李凯
申请日： 2008-02-29 - 公布日： 2009-09-02 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用高保真DNA聚合酶介导的替换性引物延伸反应进行序列分析的方法，步骤为：(1)准备耐3’-5’核酸外切酶消化的引物；(2)以单一种类的荧光标记ddNTP与非荧光标记同种类dNTP为底物，在不具有3’-5’核酸外切酶活性DNA聚合酶催化下，进行部分性链终止引物延伸反应；(3)耐3’-5’核酸外切酶消化的dNTP在具有3’-5’核酸外切酶活性的高保真DNA聚合酶催化下进行的替换性引物延伸反应
利用高保真 dna 聚合酶介导替换引物延伸反应进行序列分析方法

[发明专利]基于核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略的TP53检测方法-CN201811055080.5在审
发明人：杨大威;缪鹏;陈锡峰;孟凡渝 -专利权人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
申请日： 2018-09-11 - 公布日： 2019-02-26 - 主分类号： C12Q1/682 文献下载
摘要：本发明公开了基于核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略的TP 53检测方法，包括以下步骤：1)制备含金纳米颗粒的金胶；2)用DNA探针修饰金纳米颗粒；3)将颈环DNA、TP 53混合于缓冲液，加入核酸外切酶本发明通过核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略，将待测物质TP 53浓度的检测限大大降低。本发明用于检测TP 53具有灵敏度高、快速、成本低的特点，检测限为21fM，通过设计的核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略和荧光光谱技术的结合，可以实现TP 53生物传感的应用。
核酸外切酶III 双重信号核酶放大检测金纳米颗粒修饰荧光光谱技术反应溶液金胶溶液生物传感荧光信号缓冲液灵敏度氯化锌金胶颈环制备测量应用

[发明专利]一种检测核酸外切酶I活性的探针及其制备方法和应用-CN201810178752.5有效
发明人：梁继超;熊华玉;宋佳宜;杜春园 -专利权人：湖北大学
申请日： 2018-03-05 - 公布日： 2021-08-24 - 主分类号： C12Q1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测核酸外切酶I活性的探针及其制备方法和应用。所述探针是由单链DNA为模板制备的DNA/Au纳米簇，即ssDNA‑AuNCs；所述单链DNA由4‑30个重复的AC碱基序列构成。所述ssDNA‑AuNCs探针由水合氯金酸和单链DNA及抗坏血酸反应合成，以金纳米簇为荧光物质，制备方法简单，易操作，制得的探针荧光反应明显，本发明利用核酸外切酶I剪切单链DNA分子的特性，以及复合在单链DNA分子上的Au纳米簇在失去DNA分子保护后会聚集在一起失去荧光的特性，通过核酸外切酶I与所述探针反应后体系的荧光变化，判断核酸外切酶I的活性，检测方式简单，可靠性高。
一种检测核酸外切酶活性探针及其制备方法应用

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